欢迎进入石家庄闻方科技有限公司!
技术文章
首页 > 技术文章 > 核酸凝胶染料泡染法的操作方法及注意事项

核酸凝胶染料泡染法的操作方法及注意事项

 发布时间:2020-04-20 点击量:203
  核酸凝胶染料泡染法的操作方法及注意事项
 
  泡染法
 
  (1) 按照常规方法进行电泳。
 
  (2) 用H2O将MKRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如将15μL MKRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
 
  (3) 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,zui合适染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
 
  1、此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
 
  2、由于MKRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将MKRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。MKRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
 
  3、如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。
 
  4、此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
 
  注意事项:
 
  1、用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
 
  2、3× MKRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。