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荧光素钾盐在应用中常见的问题解析

 发布时间:2020-04-07 点击量:281
  荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,D-荧光素钾被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、**、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至0.02 pg 水平的荧光素酶。
 
  荧光素钾盐可使luc标记基因和荧光素酶融合蛋白在活细胞、组织和生物体的表达成像,广泛应用于报告基因的分析和卫生监控。
 
  荧光素适合做哪些实验?
 
  荧光素钾盐和5-氟-荧光素,作为Luciferase的作用底物,常用于以下实验:
 
  1. 报告基因分析
 
  2. In vivo imaging (动物活体成像)
 
  3. In vitro imaging (细胞体外分析)
 
  4. ATP测定
 
  5. 其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作
 
  2、荧光素应用于活体成像的基本原理
 
  细胞中D-荧光素酶参与的化学发光反应遵守酶促反应的基本原理,在底物D-荧光素钾过量的情况下,反应产生的光子数(发光量)与细胞中的D-荧光素酶的量成正相关,从而可以推算出细胞的数量。
 
  3、荧光素钾盐溶液的稳定性
 
  荧光素钾盐易溶于水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。
 
  溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。
 
  D-荧光素配成溶液后,在保存条件(-80°C,pH,无氧气)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-荧光素应尽量在1年内使用完。
 
  有水存在的情况下,主要发生消旋化作用,即D-荧光素转化成L-荧光素,有报道称L-荧光素对荧光素酶催化的酶促反应有抑制作用。
 
  4、荧光素、荧光素钠和D-荧光素钾之间的区别
 
  主要区别在于溶解和分散性能。D-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度高,且溶解速度较快,故在一般的生物学试验中常用D-荧光素钾盐。
 
  5、D-荧光素钾盐的保存和运输条件
 
  保存条件:≤-20°C,避光,保持干燥。(在不打开包装的条件下,可保存两年时间)。
 
  运输条件:高纯度的D-荧光素钾盐可在短时间内常温条件下保存,运输条件为常温。
 
  原装(没有打开包装)荧光素的包装瓶中充有氩气,保证其稳定性,打开包装后,请严格按照保存条件保存。
 
  荧光素钾盐具有易溶于水的特性,其暴露于空气中,易吸潮。在称量过程中,请考虑其易吸潮的特性,*行温度平衡,再快速称取